無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法 

1．工作室應(yīng)矮小、平整，面積只需4米2左右，高2.2―2.3米，內(nèi)部裝修應(yīng)平整、光滑，無凹凸不平或棱角等，四 壁及屋頂應(yīng)用不透水之材質(zhì)，便于擦洗及殺菌。 

2．室內(nèi)采光面積大，從室外應(yīng)能看到室內(nèi)情況。 

3．為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設(shè)緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間，其面積可小于無菌室。 

 4．無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及供消毒空氣用紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以1米為宜，其電源 開關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。

 5．無菌室與緩沖間進出口應(yīng)設(shè)拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門應(yīng)錯開，以免空氣對流造成污染。 

6．無菌室的使用與管理 

（1）無菌室應(yīng)保持清潔整齊，室內(nèi)僅存放必須的檢驗用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、 玻璃鉛筆等。&不要放與檢測無關(guān)的物品 （2） 室內(nèi)檢驗用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。 

（3）每2―3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空 氣，最后紫外燈殺菌半小時 

（4）定期檢查室內(nèi)空氣無菌狀況，細菌數(shù)應(yīng)控制在10個以下，發(fā)現(xiàn)不符合要求時，應(yīng)立即徹底消毒滅菌。/無 菌室無菌程度的測定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養(yǎng)基平板各3個（平板直徑均9厘米），置無菌室 各工作位置上，開蓋曝露半小時，然后倒置進行培養(yǎng)，測細菌總數(shù)應(yīng)置37℃溫箱培養(yǎng)48小時；測霉菌數(shù)則應(yīng)置 27℃溫箱培養(yǎng)5天。細菌`霉菌總數(shù)均不得超過10個為。 

（5）無菌室殺菌前，應(yīng)將所有物品置于操作之部位（待檢物例外），然后打開紫外燈殺菌30分鐘，時間一到， 關(guān)閉紫外燈待用 

（6）進入無菌室前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。 

（7） 操作應(yīng)嚴格按照無菌操作規(guī)定進行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。 無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法 微生物檢驗用器材及場所必須進行滅菌或消毒處理，不同的對象采用不同的處理方法。 

1． 高壓蒸汽滅菌:工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內(nèi)，一般采用121℃滅菌半小時,當然不同的培養(yǎng)基 有不同的要求,應(yīng)分別處理 

2． 火焰滅菌： 接種針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌

 3． 高溫干燥滅菌： 各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃滅菌2小時 

4． 一 般消毒:無菌室內(nèi)的凳、工作臺、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進行滅菌，必須用其他方法進 行消毒處理，采用2%石炭酸或來蘇兒水溶液擦拭消毒，工作人員的手也用此法進行消毒 

5． 空氣的消毒： 開啟紫外燈照射30―60分鐘 即可。

 無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法

 1． 先進行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30―60分鐘 

2． 檢驗用的有關(guān)器材， 搬入無菌室前必須分別進會滅菌消毒 3． 操作人員必須將手清洗消毒，穿戴好無菌工作衣、帽和鞋，才能進入無菌室 4． 進入無菌室后再一次消毒手部，然后才進行檢驗操作 

無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法 

1． 動作要輕，不能太快，以免攪動空氣增加污染；玻璃器皿也應(yīng)輕取輕放，以免破損污染環(huán)境

 2． 操作應(yīng)在近火焰區(qū)進行。 

3． 接種環(huán)、接種針等金屬器材使用前后均需灼燒，灼燒時先通過內(nèi)焰，使殘物烘干后再灼燒滅菌

 4． 使用吸管時，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必須用洗耳球操作。 

5． 觀察平板時不好 開蓋，如欲沾取菌落檢查時，必需靠近火焰區(qū)操作，平皿蓋也不能 大開，而是上下蓋適當 開縫。 

6．進行可疑致病菌涂片染色時，應(yīng)使用夾子夾持玻片，切勿用手直接拿玻片，以免造成污染，用過的玻片也應(yīng) 置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗滌。 

7． 工作結(jié)束，收拾好工作臺上的樣品及器材，最后用消毒液擦拭工作臺。 

無菌室管理規(guī)定 

1、無菌室地面、臺面、其它表面每日晨擦拭1次。超凈臺每日晨75%酒精擦拭超凈臺消毒，每次使用前準備好物 品，將超凈臺紫外滅菌30分鐘后方可使用。

2、從室外帶入無菌室內(nèi)的所有物品表面要用75%酒精或紫外照射預(yù)先消毒。無菌操作前75%酒精消毒手掌、手 背。整個操作嚴格執(zhí)行無菌操作。

3、 每人次使用后，臺內(nèi)物品全部取出并用消毒液噴灑消毒用后的物品歸位，垃圾帶出無菌室。連續(xù)使用時間超 過1小時，請預(yù)約登記。 

4、無菌室內(nèi)電腦生物反應(yīng)器專用，閑人免用。使用后將防塵罩罩上，防止紫外直接照射。 

5、無菌室內(nèi)定期消毒滅菌：噴灑3-5%石炭酸溶液并用2-3%來蘇水擦洗桌面、凳子，無菌室內(nèi)噴霧消毒

6. 無菌室內(nèi)無菌狀況定期檢測：滅菌后的接種室內(nèi)桌上和桌下各放一套培養(yǎng)基平皿，暴露15分鐘，蓋上，37℃ 培養(yǎng)24小時，每個平皿的菌落≤4，則認為效果良好，否則需延長照射時間或加強其它措施。每周一次。 

7. 滅菌后物品放在指定位置，注明滅菌日期，高壓滅菌物品可存放7-14天，過期不能再用，需重新包裝滅菌。 

8. 所有準備進入無菌室工作的人員必需首先了解細胞培養(yǎng)的基本要求和操作規(guī)范，并進行必要的培訓。 

9. 進入無菌室前需提交相關(guān)實驗計劃：包括使用細胞種類、數(shù)量；所需試劑種類，試劑是否有毒；培養(yǎng)液種 類；實驗時間等。不歡迎沒有計劃和計劃不可行的人員進行漫無目的的測試。 

10. 每一個研究人員的培養(yǎng)細胞；細胞培養(yǎng)箱內(nèi)的位置；培養(yǎng)液；消化液；消毒物品；消毒物品擺放位置等都固 定化，并作好標記。禁止交叉亂用，亂放，造成可能的污染擴大，所有研究人員未經(jīng)本人許可不得使用他人的物 品和位置。 

11. 通用性的液體（如培養(yǎng)液、消化液、生理鹽水、鈣溶液）由管理人員統(tǒng)一配制，專人管理，便于進行質(zhì)量控 制和研究人員的計費。研究人員根據(jù)需要申領(lǐng)，并作好標記，做到專人專物專用，嚴禁未經(jīng)他人許可亂用他人物 品。培養(yǎng)液只有在用完后可再申領(lǐng)新瓶，防止浪費。 

12. 研究生實驗用物品領(lǐng)取登記后自己保存管理。實驗前泡酸、包裝和消毒，實驗后及時洗刷、干燥、歸位。